银耳多糖益生元效应的研究

银耳多糖益生元效应的研究

Study on the Prebiotic Effect of

Tremella Fuciformis Polysaccharide

摘要：银耳是一种非常重要的食用菌和药用真菌，具有非常多的药理作用。本研究通过体外实验研究了银耳多糖的益生元效应，研究结果表明，银耳多糖能够促进双歧杆菌和乳酸杆菌的生长，且成剂量关系；0.5%的银耳多糖对青春双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、嗜酸乳杆菌及鼠李糖乳杆菌的生长促进效果最显著；同时可以通过降低pH，提高B/E值，增强肠道有益微生物定植。

银耳在我国是最受欢迎的食用菌和药用真菌之一，又称为雪耳或者白蘑菇，现在市场上的银耳几乎都是是商业化栽培所得。银耳的子实体富含蛋白质、多糖、膳食纤维、多种矿物质、微量元素和维生素。子实体中的银耳多糖主要是酸性多糖，具有提高人体免疫、抑制肿瘤、抗衰老及清除自由基间等生物学功能。有研究表明，子实体中提取的银耳多糖主链为由a-（1，3）-糖苷键组成的甘露聚糖，主链的2，4，6位上链接有葡萄糖、木糖、岩藻糖及葡萄糖醛酸等残基组成的侧链。有研究者认为食用菌多糖是具有益生元效应的活性物质，如GUO等人利用银耳多糖，以鸡为研究的对象，通过对鸡盲肠的分析发现，多糖能够发酵产生挥发性脂肪酸，改善肠道内微生物菌群的组成和活性。同时进行体外实验，证明银耳多糖能够促进双歧杆菌生长。本研究利用体外实验分析银耳多糖益生元效应情况，为银耳多糖益生元的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

银耳多糖，MRS液体培养基和MRS琼脂培养基，TPY液体培养基和TPY琼脂养基，TSB肉汤液体培养基和TSA琼脂培养基。青春双歧杆菌（编号：GDMCC1.278）、长双歧杆菌婴儿亚种（编号：GDMCC1.207）、嗜酸乳杆菌（编号：GDMCC1.208）、鼠李糖乳杆菌（编号：GDMCC1.325）、大肠杆菌（编号：GDMCC1.737）和沙门氏菌（编号：GDMCC1.237），所有菌株购自广东省微生物菌种保藏中心。

1.2 仪器与设备

SX-BHC生物安全柜（苏州净化设备有限公司）、恒温培养箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）、摇床（上海世平实验设备有限公司）、高压燕汽灭菌锅（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）和pH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 菌种活化

冻干粉菌种活化，首次活化，干粉要全部用完，不能保留，干粉用尽量少的MRS、TYP、TSB培养液溶解，接种在5mL液体培养基中，静止培养。将双歧杆菌接种于TPY液体培养基，37℃厌氧培养48h；乳酸菌接种于MRS液体培养基，37℃培养24h。将大肠杆菌及沙门氏菌接种于肉汤液体培养基37℃培养24h，分别涂片、染色、镜检，观察菌体形态正确后，开始后续研究。

1.3.2 不同浓度银耳多糖对有益菌和有害菌的影响

银耳多糖为实验室提取保存，用去离子无菌水配制成浓度为0.10%、0.05%、0.01%的液体，取一个96孔平板，在孔中加入90μL银耳多糖溶液，分别接入10μL的青春双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、嗜酸.乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌菌液，放在厌氧摇床上培养37℃，24h，取出OD₆₀₀检测（检测前轻微晃动96孔板）。

1.3.3 不同益生元调节肠道菌群作用

采用GAM培养基为基础培养基（未加葡萄糖），对照组1不加葡萄糖，实验组分别为0.10%、0.05%、0.01%银耳多糖，每组设置3个平行，每个样品装液量为50mL，灭菌处理，取新鲜健康人的粪便10g加入到200mL生理盐水中充分混合，分别取上清1mL加入到空白组和实验组中，37℃发酵培养24h。检测发酵24h后发酵液中肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌和乳酸菌的值，以及发酵液中的pH值，并计算B/E值，值越高表示益生菌在体内的定植抗力越强。

2 结果与分析

2.1 不同浓度银耳多糖对有益菌和有害菌的影响

由图1可知，不同浓度的银耳多糖对微生物生长的影响不同，对双歧杆菌和乳酸杆菌，银耳多糖能够促进其生长且成剂量关系，0.5%的银耳多糖对青春双歧杆菌、长双歧杆菌婴儿亚种、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌的生长促进效果最显著。而对于大肠杆菌和沙门氏菌来说，银耳多糖抑制作用不明显，也没有很好的促进效果。总体来看，银耳多糖可以作为一种益生元促进肠道有益微生物的生长。

（图1   不同浓度的银耳多糖对几种微生物的生长情况影响图）

2.2 不同浓度银耳多糖对肠道菌群调节作用

由表1可知，发酵24h后，肠道菌群数量测定，不同浓度银耳多糖与对照组相比较，双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌均增多，但乳杆菌和双歧杆菌增加显著（p<0.01）；与对照组相比，3个实验组的pH值明显降低（p<0.05），但各试验组间差异无显著性（p>0.05）；发酵24h后测得的B/E值可以发现0.01%浓度银耳多糖组最高，表明肠道微生物定植抗力更强。

3 结论

研究结果表明，银耳多糖可以作为一种益生元发挥益生元效应，从体外实验可以发现随着银耳多糖的含量提高，双歧杆菌和乳酸菌的数量明显增多，同时大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌的生长不明显。发酵24h肠道菌群数量测定，各实验组肠道菌与对照组相比较双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌均增多；pH值降低，各试验组间差异无显著性（p>0.05）。银耳多糖对有害菌群（肠杆菌、肠球菌）的增殖效果要弱，而银耳多糖对人体肠道内的有益菌群（双歧杆菌、乳杆菌）增殖有明显促进作用。

论文作者：李国光

（上海辉文生物技术股份有限公司）